Nhà Sinh Học Trẻ

Diễn Đàn của những Bạn Trẻ yêu thích Sinh Học
Hôm nay, Thứ sáu 19/12/14 2:56 pm

Thời gian được tính theo giờ UTC + 7 Giờ


Nội quy chuyên mục


Không gởi bài xin tài liệu trong chuyên mục này (xem chuyên mục "Tài liệu theo yêu cầu")



Tạo chủ đề mới Gửi bài trả lời  [ 12 bài viết ] 
Người gửi Nội dung
 Tiêu đề bài viết: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 27/06/11 12:10 pm 
Ngoại tuyến
virus
virus

Ngày tham gia: Thứ sáu 09/04/10 8:48 am
Bài viết: 19
Chào mọi người!
Hôm trước nhóm mình có thực hành về Xác định hoạt tính enzym amylase (dùng phương pháp so màu thuốc thử DNS), mình đọc tài liệu thì thấy khi đo OD, người ta lại sử dụng mẫu blank là enzym amylase đã mất hoạt tính. Trong khi mình thực hành, mẫu trắng lại không có tí enzym nào cả. Vậy mình thắc mắc ở chỗ mẫu blank nào tốt hơn, enzym mất hoạt tính hay là không có enzym ?
Mong mọi người giúp đỡ, cám ơn nhiều ha!


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 27/06/11 2:06 pm 
Ngoại tuyến
Chuyên gia
Chuyên gia
Hình đại diện của thành viên

Ngày tham gia: Chủ nhật 03/04/05 8:24 am
Bài viết: 421
Đến từ: Ở trển mới dzìa mờ...
mkcuong đã viết:
Chào mọi người!
Hôm trước nhóm mình có thực hành về Xác định hoạt tính enzym amylase (dùng phương pháp so màu thuốc thử DNS), mình đọc tài liệu thì thấy khi đo OD, người ta lại sử dụng mẫu blank là enzym amylase đã mất hoạt tính. Trong khi mình thực hành, mẫu trắng lại không có tí enzym nào cả. Vậy mình thắc mắc ở chỗ mẫu blank nào tốt hơn, enzym mất hoạt tính hay là không có enzym ?
Mong mọi người giúp đỡ, cám ơn nhiều ha!


Xác định hoạt tính và xác định hoạt độ là hai khái niệm hoàn toàn khác nhau. Bạn xem lại, bạn đang thực sự quan tâm đến cái nào?
amylase gồm 1 số loại như: alpha amylase, beta amylase, glucose amylase; mỗi loại có cách xác định hoạt độ khác nhau. Bạn đang đề cập đến amylase nào? Tốt hơn là bạn nên đưa chỉ số EC của loại enzyme (VD: alpha amylase là EC 3.2.1.1) mà bạn đề cập đến.
Theo ongbut biết, xác định hoạt độ (enzyme activity) của amylase bằng phương pháp có sử dụng DNS không dùng mẫu trắng mà dùng đường chuẩn. Bạn có thể gửi cách đo của bạn và gửi luôn nguồn tài liệu tham khảo. Chỉ e rằng phương pháp mà bạn dùng không chuẩn. :D

_________________
ONG BUT


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 27/06/11 2:44 pm 
Ngoại tuyến
virus
virus

Ngày tham gia: Thứ sáu 09/04/10 8:48 am
Bài viết: 19
Hì, bài thực hành của mình không yêu cầu sâu nên những chỉ số như EC cũng không thấy đề cập đến. Đây chỉ là bài thực hành "sơ sơ" trên trường thôi. Bài của mình cũng không khảo sát cụ thể loại amylase nào.
Mình sẽ tóm tắt quy trình cho bạn hiểu là mình làm cái gì:
- Dựng đường chuẩn bằng nồng độ đường glucose biết trước.Đường chuẩn giữa OD/nồng độ đường.
- Dịch enzym thô (dịch này tách từ sinh khối A. oryzae) có chứa amylase (cũng không cần biết cụ thể nó là amylase nào) cho vào hồ tinh bột, rồi ủ, sau đó thêm DNS. Nó sẽ có màu đỏ, rồi đo OD. Mẫu blank của mình sẽ có hồ tinh bột và DNS.
Bài thực hành có tên : Xác định hoạt tính enzym amylase.
Ý mình muốn hỏi ở đây là: Khi mình đo OD , thường sẽ có đo mẫu blank đầu tiên, vậy thì mẫu blank nào tốt hơn: DNS + hồ tinh bột +nước hay DNS+hồ tinh bột+enzym đã bất hoạt+nước ?
Mình thắc mắc là vì mình có đọc cuốn sách "Kỹ thuật thực phẩm", tác giả thì mình không để ý (có gì mình coi lại rồi bổ sung sau), có phương pháp xác định hoạt tính enzym nhưng là protease, khi đo OD người ta lại dùng mẫu blank có chứa enzym đã bị bất hoạt.


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 27/06/11 3:03 pm 
Ngoại tuyến
Chuyên gia
Chuyên gia
Hình đại diện của thành viên

Ngày tham gia: Chủ nhật 03/04/05 8:24 am
Bài viết: 421
Đến từ: Ở trển mới dzìa mờ...
Trả lời:
1) Các thao tác bạn nêu là nhằm xác định hoạt độ (enzyme activity) của enzyme. Nhưng vì đây là một hỗn hợp các loại enzyme (ngầm hiểu là các enzyme có khả năng thủy phân tinh bột ở các mức độ khác nhau) cho nên không thể gọi đây là xác định hoạt độ enzyme được mà phải gọi là xác định mức độ phân cắt (thủy phân) tinh bột, thường gọi là xác định reducing power (mức độ khử được qui ra thành nồng độ glucose. Và nếu có là xác định mức độ khử thì phương pháp này chắc không phải là 1 phương pháp chuẩn, chỉ là 1 bài thực hành mang tính "mô tả". Mục tiêu của bài thực hành chắc là để kiểm tra xem trong mẫu enzyme thô có mặt nhóm enzyme amylase hay không và nhiều hay ít mà thôi.
2) nếu bắt buộc phải có mẫu blank thì phải có mặt enzyme đã được làm mất hoạt tính
3) Các bước bạn nêu thiếu bước ly tâm để tách phần cặn trong dung dịch phản ứng trước khi cho DNS vào, nếu thiếu bước này đảm bảo cho vào máy quang phổ kế sẽ cho kết quả lung tung :D
4) Khi xác định hoạt độ enzyme thuộc nhóm amylase, người ta không dùng hồ tinh bột theo cách bạn miêu tả
5) Bạn vẫn chưa cho biết nguồn tài liệu mà bạn tham khảo, hay ít ra cho ongbut biết bài thực hành của bạn là ở trường nào chứ nhỉ? Ongbut thấy có vẻ quen quen dạng bài thực hành này ;)

_________________
ONG BUT


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 27/06/11 3:19 pm 
Ngoại tuyến
virus
virus

Ngày tham gia: Thứ sáu 09/04/10 8:48 am
Bài viết: 19
- Về ly tâm, đúng là chẳng có bước ly tâm . Chỉ có bài thực hành trước đó là có ly tâm lạnh, nhưng là để tách sinh khối ra khỏi dịch enzym thô.
- Theo như bạn nói là mẫu blank thì sử dụng enzym đã bất hoạt, bạn cho mình hỏi thêm là sao mình không xài blank không có enzym ? tức là chỉ gồm DNS +hồ tinh bột+nước.
- Mình học trường ĐH Công Nghiệp ở Gò Vấp ấy. Bài thực hành này của môn Enzym


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 27/06/11 3:28 pm 
Ngoại tuyến
Chuyên gia
Chuyên gia
Hình đại diện của thành viên

Ngày tham gia: Chủ nhật 03/04/05 8:24 am
Bài viết: 421
Đến từ: Ở trển mới dzìa mờ...
1) mẫu blank là mẫu có thành phần giống mẫu "thật", nhưng...không có phản ứng (chính, phản ứng đang nghiên cứu)
2) Không có bước ly tâm, thì tinh bột và các thành phần (không hòa tan) còn sót lại sẽ làm lệch kết quả đo, vì ta đang cần đo đường khử (bằng DNS) phải không nào?
3) Ongbut vốn không nghĩ đến trường bạn, mà lại đang liên tưởng đến 1 trường khác :)) . Nhưng e rằng, bài thực hành của bạn ít nhiều có tham khảo đến nguồn tài liệu từ trường mà ongbut đang liên tưởng :D
4) Nhưng không sao, như đã nói, bài thực hành này nhằm mục tiêu mô tả 1 số vấn đề mà người dạy muốn nói đến. Đây không phải là 1 nghiên cứu chính thức.

_________________
ONG BUT


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 27/06/11 3:35 pm 
Ngoại tuyến
virus
virus

Ngày tham gia: Thứ sáu 09/04/10 8:48 am
Bài viết: 19
Uhm, cám ơn bạn đã giải đáp tận tình.
Chắc bạn liên tưởng đến Trường ĐH KHTN vì mình nghe nói hầu hết, gần 100%, giáo trình của bọn mình học đều theo trường đó.
Bài này thực hành chơi chơi thôi, chả có giá trị gì đâu, ^_^


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 27/06/11 4:12 pm 
Ngoại tuyến
Chuyên gia
Chuyên gia
Hình đại diện của thành viên

Ngày tham gia: Chủ nhật 03/04/05 8:24 am
Bài viết: 421
Đến từ: Ở trển mới dzìa mờ...
mkcuong đã viết:
Uhm, cám ơn bạn đã giải đáp tận tình.
Chắc bạn liên tưởng đến Trường ĐH KHTN vì mình nghe nói hầu hết, gần 100%, giáo trình của bọn mình học đều theo trường đó.
Bài này thực hành chơi chơi thôi, chả có giá trị gì đâu, ^_^


Sao tới 100% lận, nhiều quá :D . Thật tình là ongbut lại liên tưởng đến trường khác. Mà không sao! Bạn học CNSH hay CNTP bên đó? Nếu CNSH thì cái tỉ lệ trên chắc hơi hơi đúng :D , vì theo ongbut biết hầu hết các thầy cô bên bộ môn CNSH chỗ bạn từng theo học KHTN. Không có gì lạ cả, KHTN là một trong những cái nôi của CNSH và cũng là 1 trong những nơi có CNSH phát triển mạnh ở miền Nam.
Bài thực hành của bạn không hề chơi chơi như bạn nghĩ đâu nhé [-X . Như đã nói, nó có những giá trị riêng phục vụ mục tiêu giảng dạy của GVHD.

_________________
ONG BUT


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ ba 28/06/11 10:11 am 
Ngoại tuyến
virus
virus

Ngày tham gia: Thứ sáu 09/04/10 8:48 am
Bài viết: 19
Hì hì, chơi chơi theo ý mình là kết quả của nó hầu như không tin tưởng được, chỉ làm để hiểu bài mình học thôi.
Hôm nay, mình đọc lại mấy cái reply của bạn thì thấy có chỗ bạn nói xác định hoạt tính và hoạt độ là khác nhau, vậy nên mình tự suy ra hoạt tính và hoạt độ là khác nhau. Bạn có tài liệu nào nói về cái này và có thể share cho mình được ko ? Tiếng Anh cũng được (đừng có tiếng Tàu, tiếng Ý, tiếng Ấn....là được :D :D :D )
Theo như mình search trên google khá nhiều người đồng nhất hai khái niệm này với nhau.
Cám ơn bạn.


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ ba 28/06/11 10:34 am 
Ngoại tuyến
Chuyên gia
Chuyên gia
Hình đại diện của thành viên

Ngày tham gia: Chủ nhật 03/04/05 8:24 am
Bài viết: 421
Đến từ: Ở trển mới dzìa mờ...
1) Hoạt tính và hoạt độ enzyme là những từ tiếng Việt "cố gắng" để dịch nghĩa các thuật ngữ từ tiếng Anh. Một số người nhầm lần 2 khái niệm trên (http://en.wikipedia.org/wiki/Enzyme)
2) Hoạt tính (Reaction catalysed): ví dụ http://expasy.org/enzyme/2.4.1.25, http://expasy.org/enzyme/3.2.1.1....
3) Tính chất (properties): miêu tả 1 số đặc điểm của enzyme về cấu trúc, khoảng pH cho hoạt độ (enzyme activity) mạnh nhất, khoảng pH giữ cho hoạt tính enzyme bền nhất (enzyme stability), ảnh hưởng của các chất ức chế (inhibitor)....VD: http://www.ias.ac.in/jarch/jbiosci/7/257-268.pdf, http://biologia.savba.sk/Suppl_11/Saboury.pdf
4) Hoạt độ (enzyme assay, hay enzym activity): vD: http://www.megazyme.com/downloads/en/data/S-RSTAR.pdf. http://www.megazyme.com/downloads/en/data/R-BAMR3.pdf

_________________
ONG BUT


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ hai 14/05/12 4:04 pm 
Ngoại tuyến
coaserva
coaserva

Ngày tham gia: Thứ tư 14/10/09 12:57 pm
Bài viết: 14
Hiện mình đang thu nhận Enzyme Apha amylase từ nấm mốc. Theo mình biết đó làm hỗn hợp các Enzyme: Apha, beta, gama... amylase. Thì làm sao xác định hoạt tính từng loại enzyem đó.
Bạn nào biết bảo mình nhé, mình xin cảm ơn.


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
 Tiêu đề bài viết: Re: Hoạt tính enzym
Gửi bàiĐã gửi: Thứ ba 15/05/12 1:25 pm 
Ngoại tuyến
Chuyên gia
Chuyên gia
Hình đại diện của thành viên

Ngày tham gia: Chủ nhật 03/04/05 8:24 am
Bài viết: 421
Đến từ: Ở trển mới dzìa mờ...
daovanminh đã viết:
Hiện mình đang thu nhận Enzyme Apha amylase từ nấm mốc. Theo mình biết đó làm hỗn hợp các Enzyme: Apha, beta, gama... amylase. Thì làm sao xác định hoạt tính từng loại enzyem đó.
Bạn nào biết bảo mình nhé, mình xin cảm ơn.


Ongbut thấy thế này, việc xác định hoạt tính hay hoạt độ của từng loại enzyme trong nhóm amylase không có gì quá khó, tất cả đều đã có những phương pháp được đăng tải trên các tạp chí khoa học. Vấn đề khó hơn trong nghiên cứu của bạn chính là làm sao tách được chúng ra. Như đã biết, alpha-, beta- và gluco-amylase khi hoạt động trên cùng một cơ chất sẽ tạo ra sản phẩm khác nhau, căn cứ vào đó các phương pháp xác định hoạt tính/hoạt độ được xây dựng. Bạn daovanminh, chịu khó tìm trên google các bài báo. Ongbut thấy, có rất nhiều bài báo free đấy!

_________________
ONG BUT


Đầu trang
 Xem thông tin cá nhân  
 
Hiển thị những bài viết cách đây:  Sắp xếp theo  
Tạo chủ đề mới Gửi bài trả lời  [ 12 bài viết ] 

Thời gian được tính theo giờ UTC + 7 Giờ


Ai đang trực tuyến?

Đang xem chuyên mục này: Không có thành viên nào đang trực tuyến1 khách


Bạn không thể tạo chủ đề mới trong chuyên mục này.
Bạn không thể trả lời bài viết trong chuyên mục này.
Bạn không thể sửa những bài viết của mình trong chuyên mục này.
Bạn không thể xoá những bài viết của mình trong chuyên mục này.
Bạn không thể gửi tập tin đính kèm trong chuyên mục này.

Tìm kiếm với từ khoá:
Chuyển đến:  
POWERED_BY
Vietnamese language pack for phpBB 3.0.x download and support.